氨基酸怎麼寫

氨基酸鑑定（紙層析法）；醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白一.實驗目的；1.掌握醋酸纖維素薄膜電泳法分離血清蛋白的原理和；3.掌握氨基酸紙層析的操作技術二.實驗原理二.實；1）氨基酸的分離鑑定——紙層析法；紙層析法（paperchromatography；在一定條件下某種物質的Rf值是常數；Rf值的大小與物質的結構、性質、溶劑系統、溫度、；2）血清蛋白醋酸纖維素薄氨基酸鑑定 （紙層析法）醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白 一.實驗目的1.掌握醋酸纖維素薄膜電泳法分離血清蛋白的原理和方法。

2.學習氨基酸紙層析法的基本原理3.掌握氨基酸紙層析的操作技術二.實驗原理 二.實驗原理1）氨基酸的分離鑑定——紙層析法紙層析法（paper chromatography）是生物化學上分離、鑑定氨基酸混合物的常用技術，可用於蛋白質的氨基酸成分的定性鑑定和定量測定；也是定性或定量測定多肽、核酸鹼基、糖、有機酸、維生素、抗菌素等物質的一種分離分析工具。紙層析法是用濾紙作為惰性支援物的分配層析法，其中濾紙纖維素上吸附的水是固定相，展層用的有機溶溶劑是流動相。

在層析時，將樣品點在距濾紙一端約2~3cm的某一處，該點稱為原點；然後在密閉容器中層析溶劑沿濾紙的一個方向進行展層，這樣混合氨基酸在兩相中不斷分配，由於分配係數（Kd）不同，結果它們分佈在濾紙的不同位置上。物質被分離後在紙層析圖譜上的位置可用比移值（rate of flow, Rf）來表示。

所謂Rf，是指在紙層析中，從原點至氨基酸停留點（又稱為層析點）中心的距離（X）與原點至溶劑前沿的距離（Y）的比值：在一定條件下某種物質的Rf值是常數。Rf值的大小與物質的結構、性質、溶劑系統、溫度、溼度、層析濾紙的型號和質量等因素有關。

2）血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳電泳的概念：帶電物質在電場中向相反電極移動的現象稱為電泳.醋酸纖維是纖維素的醋酸酯，由纖維素的羥基經乙醯化而成。塗抹成均勻的薄膜則成為醋酸纖維素薄膜。

該膜具有均一的泡沫狀的結構，有強滲透性，厚度約為120微米。醋酸纖維素薄膜電泳有以下優點：微量、快速、簡便、分辨力高、對樣品無拖尾和吸附現象蛋白質是兩性電解質。

在pH值小於其等電點的溶液中，蛋白質為正離子，在電場中向陰極移動；在pH值大於其等電點的溶液中，蛋白質為負離子，在電場中向陽極移動。血清中含有數種蛋白質，它們所具有的可解離基團不同，在同一pH的溶液中，所帶淨電荷不同，故可利用電泳法將它們分離。

血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等，各種蛋白質由於氨基酸祖墳、立體構象、相對分子質量、等電點及形狀不同，在電場中遷移速度不同。由表可知，血清中5種蛋白質的等電點大部分低於pH值7.0，區帶剪下，分別用0.4mol/L NaOH溶液浸洗下來，進行比色，測定其相對含量。

也可以將染色後的薄膜直接用光密度計掃描，測定其相對含量。腎病、瀰漫性肝損害、肝硬化、原發性肝癌、多發性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。

腎病時α1、α2、β球蛋白升高，γ-球蛋白降低。肝硬化時α2、β-球蛋白降低，而α1、γ-球蛋白升高。

三.實驗試劑酸相容劑：V（正丁醇）：V(88%甲酸)：V（水）=15:3:2 顯色儲備液巴比妥-巴比妥鈉緩衝液：取兩個大燒杯，分別稱取巴比妥鈉和巴比妥溶解於500ml蒸餾水中； 透明液（20ml每組）：無水乙醇：冰醋酸=7:3染色液（可重複使用，使用後回收） 漂洗液（100ml每組）：95%乙醇45ml，冰醋酸5ml，水50ml四.實驗操作1） 氨基酸的分離鑑定——紙層析法 1. 準備濾紙取層析濾紙（長18㎝、寬14㎝）一張，在紙的一端距邊緣2~3㎝處用鉛筆劃一條直線，在此直線上每間隔2.5㎝作一記號。 2.點樣用毛細管將各氨基酸樣品及待測樣品分別點在這5個位置上，幹後重復點樣2~3次。

每點在紙上擴散的直徑最大不超過3mm。 3.擴充套件將濾紙粘成筒狀，紙的兩邊不能接觸。

將盛有約20ml擴充套件劑的培養皿迅速置於密閉的層析缸中，並將濾紙直立於培養皿中（點樣的一端在下，擴充套件劑的液麵需低於點樣線1㎝）。待溶劑上升15~20㎝時即取出濾紙，用鉛筆描出溶劑前沿界線，自然乾燥或用吹風機熱風吹乾。

4.判斷樣品氨基酸種類根據樣品及標準氨基酸的層析點判斷待測樣品所含氨基酸種類 2） 血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳⒈ 薄膜浸泡：提前將醋酸纖維薄膜浸泡30min以上； ⒉ 電泳儀檢查：水平檢查，電源檢查； ⒊ 電泳槽的準備：在兩個電極槽中，各倒入等體積的電極緩衝液。將濾紙條對摺，翻過來，用電極緩衝液完全浸溼，架在電泳槽的四個膜支架上，使濾紙一端的長邊與支架前沿對齊，另一端浸入電極緩衝液內。

用玻璃棒輕輕擠壓在膜支架上的濾紙以驅逐氣泡，使濾紙的一端能緊貼在膜支架上。濾紙條是兩個電極槽聯絡醋酸纖維素薄膜的橋樑，故稱為濾紙橋。

⒋ 點樣：取新鮮血清於載玻片上，將蓋玻片掰呈適宜大小，使一邊小於薄膜寬度。把浸泡好的可用的醋酸纖維素薄膜取出，用濾紙吸去表面多餘的液體，然後平鋪在濾紙上，將蓋玻片在血清中輕輕劃一下，再在膜條一端1.5~2cm處輕輕地水平落下並迅速提起，即在膜條上點上了細條狀的血清樣品，呈淡黃。